新型呼肠孤毒株筛选过程：

1 、方法：

1.1 毒株选择：选择近几年不同地区的分离株 8 株。

1.2 致病性测定：将 8 株分离株的鸭胚毒分别做 100 倍稀释，通过腿肌注射 7 日 龄肉鸭，各 5 只，观察 5 天。攻毒后第 5 天剖检观察脾脏病变。

1.3 纯化培养：选择致病力较强的 5 个毒株用鸭胚成纤维细胞(DEF)进行噬斑 纯化后，按常规方法分别传 5 代，然后测定第 5 代次的毒价(TCID50 )。

1.4 纯净性检验：将筛选到的两株病毒进行细菌、支原体和常见病毒纯检测。

2、测定

2.1 致病性测定

将 8 个分离株回归 7 日龄肉鸭， 各 5 只， 观察 5 天。攻毒后第 5 天剖检观察 脾脏病变，结果见表 1，选择 GT19 、HN22 、YN22 、SC22 、DY23 这 5 个毒株 进行细胞培养测定试验。

2.2 细胞培养与毒价测定

将筛选的 5 株病毒在 DEF 上进行连续传代，分别取第 5 代次细胞毒进行滴 定，结果：GT19 株和 SC22的毒价相对较高，见表 2。

2.3 纯净性检测

GT19 株和 SC22 株均无细菌、支原体和常见外源病毒污染。

2.4 病毒最佳接种比例

将 GT19 株和 SC22 分别以不同的稀释度接种DEF，分别滴定毒价，结果；GT19 和 SC22 均以 1000 倍稀释接种细胞时，收获的病毒毒价最高，见表 3。

3、结论

3.1 选择 GT19 和 SC22 两株病毒作为混合免疫原用于抗体制备， 即考虑了毒株的 致病力和毒价，又兼顾了毒株的地区性(北方和南方)；

3.2 毒种的最佳接种比例确定为 1000 倍稀释，收获时间 48-60h。